植物遗传转化（植物遗传转化的方法）

植物遗传转化的原理

转化原理：利用火药爆炸或高压气体加速，将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。

植物遗传转化是应用重组DNA技术、细胞组织培养 技术或种质系统转化技术，有目的地将外源基因或DNA片段插入到受体植物基因组中并通过减数分裂获得新植株的技术。

转基因技术原理：将目标基因经过人工分离、重组，然后导入、整合到生物体基因组中，改善生物原有性状或赋予新的优良性状。

转基因技术是指利用DNA重组、转化等技术将特定的外源目的基因转移到受体生物中，并使之产生可预期的、定向的遗传改变。

按照基因引入受体植物细胞的方法，植物遗传转化技术大体可分为两类：以载体为媒介的基因转移和基因或DNA的直接转移。

杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。

试述农杆菌介导的植物遗传转化中外植体培养主要有哪些阶段

植物组织培养可以分为四个阶段：（1）建立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈伤组织或器官。

将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。 （3）初代培养 接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。

由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。

含重组Ti质粒的根癌农杆菌的培养，选择合适的外植体，根癌农杆菌与外植体共培养，外植体脱毒及筛选培养，转化植株再生等步骤。

什么是植物遗传转化系统?

1、遗传转化，是指同源或异源的游离DNA分子（质粒和染色体DNA）被自然或人工感受态细胞摄取，并得到表达的水平方向的基因转移过程。

2、该系统是将目的基因连接于载体DNA上，通过载体将外源基因转入植物细胞。载体型植物遗传转化系统主要有致瘤土壤杆菌Ti质粒介导法和发根致瘤土壤杆菌Ri质粒介导法。

3、植物的遗传转化 20世纪70年代末80年代初，人们用野生型Ri和Ti质粒转化烟草和马铃薯细胞获得再生植株后，以Ti质粒为载体的植物遗传转化技术随之被建立。近年来植物的遗传转化技术得到了迅速发展，建立了多种转化系统。

载体型植物遗传转化系统是什么?

1、第三类：种质转化系统法；包括植物原位真空渗入法和花粉管通道法。（一）基因枪法；（1）原理：基因枪法把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器。

2、但缺点是遗传稳定性差，培养周期长，难度大，再生频率低。3．生殖细胞受体系统：它是以植物生殖细胞如花粉细胞、卵细胞为受体细胞进行基因转化的系统。

3、根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。

4、特点：基因枪转化率差异很大，相对于农杆菌介导的转化率要低得多，而且基因枪转化成本高，嵌合体比率大，遗传稳定性差。它的一个主要优点是不受受体植物范围的限制，而且其载体质粒的构建也相对简单。

5、转基因作物，是利用基因工程将原有作物的基因加入其它生物的遗传物质埂并将不良基因移除，从而造成品质更好的作物。通常转基因作物，可增加作物的产量、改善品质、提高抗旱、抗寒及其它特性。

6、T-DNA重组分子就可整合到植物细胞染色体DNA上，再利用植物选择标记基因筛选转化细胞。